![]() |
![]() |
![]() |
Влияние длительности сбраживания и концентрации вытяжки куриного помета на продукционные характеристики Spirulina (Arthrospira) platensis (Nordst.) Geitler.
Горбунова С.Ю. Svetlana Yu. Gorbunova
Федеральный исследовательский центр
УДК 582.464.09:582.232
Установлен оптимальный временной интервал сбраживания отходов домашней птицы для приготовления питательной среды и увеличения продукционных характеристик цианобактерии S. platensis. Обработка отходов птицефабрики заключалась в приготовлении модельных сточных вод – водной вытяжки из куриного помёта (ВКП) при различных интервалах его сбраживания (3, 21 и 30 суток). Впервые проведена сравнительная оценка кинетических характеристик S. platensis в зависимости от способа приготовления органической вытяжки (сроков сбраживания куриного помёта). Сбраживание ВКП в течение 3 суток обеспечивает максимальные значения кинетических характеристик микроводорослей при всех исследуемых концентрациях вытяжки. Исключением является вариант 10%-ой вытяжки, где значения максимальной биомассы ниже контроля на 13%. Минимальные значения ростовых характеристик S. рlatensis получены при использовали 10%-ой вытяжки куриного помета после 21 и 30 суток сбраживания. Показано, что при концентрации ВКП в культиваторах 20–30% максимальный урожай культуры выше, чем в контроле на 11–15%, при этом значительно снижаются материальные затраты на приготовление классических питательных сред с использованием минеральных солей. Ключевые слова: Spirulina (Arthrospira) platensis; ростовые характеристики; биомасса; питательная среда; вытяжка куриного помета.
Введение Птицеводство в нашей стране по праву считается наиболее динамичной и наукоёмкой отраслью мирового агропромышленного производства. С ростом населения на планете и, соответственно, увеличением спроса на сельскохозяйственную продукцию возникает необходимость в улучшении способов переработки производственных отходов и в поиске оптимальных методов их утилизации. Ежегодное увеличение поголовья птицы приводит к росту отходов предприятий птицеводства – птичьего помёта. Очевидно, что накопление отходов в окружающей среде является глобальной угрозой для водоёмов и здоровья населения, так как при их длительном хранении неизбежны процессы разложения и выделения вредные химические вещества (Лысенко, 2016; Hammouda et al., 1994). В связи с этим, учёные всего мира уделяют большое внимание разработке новых и усовершенствованию существующих методов очистки сточных вод. Более полувека назад были начаты работы по исследованию возможности очистки сточных вод с помощью микроводорослей и созданию ряда технологических систем, позволяющих управлять данным процессом. Такие системы имеют двойное преимущество: во-первых, они не позволяют питательным веществам проникать в водоёмы и вызывать их эвтрофикацию, влияя на водную жизнь и качество питьевой воды; во-вторых, они превращают солнечный свет и углекислый газ в биомассу микроводорослей, которая за счёт уникального биохимического состава имеет широкий спектр применения. Эволюционно водоросли являются более высокоразвитыми организмами, чем бактерии, и поэтому многие виды являются универсальными потребителями минеральных и органических веществ. Помимо усвоения питательных веществ клетками водорослей, существуют и другие способы их удаления, например, испарение аммиака и осаждение фосфора в результате высокого уровня pH, которое вызывается водорослями. Ряд исследователей (Mesple et al., 1996; Sivakumar et al., 2012) показали, что значительная часть, иногда до 90%, удаления фосфора обусловлена именно этим эффектом. Кроме того, известно, что все микроводоросли способны фиксировать углекислый газ и, следовательно, удалять его избыток из атмосферы. Например, водоросли в океанах поглощают ежегодно до 2 гигатонн углекислого газа (для сравнения, наземные экосистемы поглощают 1,5 гигатонн) (Moore, 2001). Таким образом, эти микроскопические организмы являются важным резервуаром углерода в биосфере. В работах (Жондарева, Горбунова, 2015; Лысенко, 2016; Nicholson, Chambers, 1996; Markou, 2015) приводятся данные, свидетельствующие о способности различных водорослей использовать животноводческие отходы, в частности отходы домашней птицы, в качестве источника биологических питательных веществ и минералов, что обеспечивает интенсивный рост и увеличение выхода конечного продукта – биомассы микроводорослей. В работе (Iyovo et al., 2010) авторы продемонстрировали применение отходов домашней птицы в качестве важного источника питательных веществ с целью повышения выхода биомассы Chlorella vulgaris при использовании аэробно сброженного помёта. Использование отходов птицефабрик при культивировании микроводорослей обеспечивает производство биомассы с высоким содержанием липидов, углеводов и белка. Получаемый таким образом урожай в дальнейшем может быть ориентирован на производство топлива и корма для животных (Dobrojan, 2010; Горбунова, 2018; Nur et al., 2019). Кроме того, наши предыдущие исследования (Горбунова, 2018) показали, что выращивание микроводорослей на вытяжке куриного помёта можно рассматривать как способ биотестирования кур на предмет содержания в их рационе антибиотиков. Известно, что применение антибиотиков в птицеводстве разрешено на законодательном уровне и широко практикуется как способ сохранения поголовья. В работе (Егупова и др., 2017) показано, что различные концентрации антибиотиков подавляют жизнедеятельность цианобактерий: не образуются гормогонии, клетки приобретают более светлую окраску и полностью разрушаются. Такие морфологические признаки были отмечены и в работе (Горбунова, 2018). Для оптимизации приготовления питательных сред на основе с/х отходов и сточных вод для роста микроводорослей были предложены несколько методов их предварительной обработки. Использование термических, химических, механических и биологических процессов позволяет снизить химическое потребление кислорода (ХПК), биологическое потребление кислорода (БПК), мутность, количество взвешенные твёрдых веществ и микроорганизмов. В работе (Hadiyanto et al., 2013) использовали водяную лилию для снижения содержания ХПК и БПК при приготовлении среды для культивирования Spirulina platensis. Авторы (Kamarudin et al., 2013) приводят результаты об увеличении биомассы Scenedesmus dimorphus при выращивании на предварительно обработанной органической среде с использованием активированного угля для увеличения проникновения света в среду. В работе (Markou, 2015) использовали 12,5 г/л гипохлорита натрия NaOCl для предварительной обработки питательных сред на основе сточных вод производства оливкового масла в целях снижения их мутности. В целом, любой процесс предварительной обработки подобных сред настоятельно рекомендуется для увеличения скорости роста микроводорослей и производства их биомассы. Таким образом, целью работы являлось исследование влияния метода обработки отходов птицефабрики на рост культуры микроводорослей, а именно – временного интервала сбраживания куриного помёта при приготовлении питательной среды на ростовые характеристики S. platensis.
Материалы и методы Эксперименты выполнялись на базе Отдела биотехнологий и фиторесурсов ФИЦ ИнБЮМ г. Севастополь. Объектом исследования являлась культура цианобактерии Spirulina platensis (Nordst.) Geitler (Arthrospira platensis (Nordstedt) Gomont), штамм IMSS-31 из ЦКП «Коллекция гидробионтов Мирового океана» ФИЦ ИнБЮМ. Для получения инокулята, спирулину в течение 5–7 суток выращивали методом накопительной культуры (Тренкеншу, 2005), при котором систематического внесения элементов питания в среду не происходит, а плотность микроводорослей увеличивается и достигает максимального значения. Культуру выращивали в стеклянных культиваторах плоскопараллельного типа (Тренкеншу и др., 2017), с рабочим объёмом 3 л при поверхностном освещении 16 кЛк на питательной среде Заррук. Скорость продувки воздухом составляла 1л·мин-1·л-1 культуры, температура среды колебалась в диапазоне 28–31ºС. Для засева экспериментальных культиваторов использовали активно делящуюся культуру, взятую на линейной стадии роста, когда её продуктивность максимальна. Начальная плотность в среднем составляла 0,08 г/л сухого вещества. Сущность метода обработки отходов птицефабрики заключалась в приготовлении модельных сточных вод – водной вытяжки из куриного помёта (ВКП). Различие в приготовлении ВКП определялось длительностью сбраживания отходов. Для приготовления вытяжки куриный помёт вязко-сыпучей консистенции сбраживали в течение 3, 21 и 30 суток с водопроводной водой в соотношении 1:9. Полученная вытяжка имела темно-коричневую окраску с ярко выраженным неприятным запахом. Чтобы снизить мутность и осадить взвесь, раствор фильтровали и центрифугировали. Предварительно определяли влажность используемого помета кур, которая составила 46%. Вытяжку использовали в качестве питательной среды для культивирования S. platensis в концентрациях 10, 20, 30% по объёму (v/v), в качестве контроля – стандартную минеральную среду Заррук (Zarrouk, 1966) (рис. 1). Поскольку рН ВКП составлял 7 единиц, а для роста S. platensis необходима щелочная реакция среды, то в питательную среду дополнительно вносили источник углерода в виде гидрокарбоната натрия в количестве, соответствующем концентрации соды в стандартной минеральной среде Заррук (16,8 г NaHCO3/л). Ежедневно проводили измерения: рН и температуры культуральной среды. Содержание абсолютно сухого вещества в культуре (АСВ) определяли объёмно-весовым, а также фотометрическим методами (Методы.., 1975) по коэффициенту пропускания суспензии спирулины в области 750 нм (T, %) в кюветах с рабочей длиной 5 мм, с последующим пересчётом на оптическую плотность по формуле D750 = -ln(T).
Результаты и обсуждение Эксперимент по выращиванию S. platensis на стандартной питательной среде Заррук и среде с ВКП длился в течение 10 суток. В общей сложности было запущено 10 лабораторных культиваторов. На рис. 1 представлены накопительные кривые по каждому варианту эксперимента.
Рис. 1. Динамика плотности культуры (г АСВ/л) S. рlatensis: Fig. 1. Dynamics of S. рlatensis culture density (g DW/l):
В большинстве вариантов на вторые сутки эксперимента культура перешла на линейную стадию роста, которая продолжалась по 4–5-е сутки. Для удобства анализа полученных экспериментальных данных, разделим их на 3 группы. 1) ВКП 10%, интервал сбраживания – 3, 21, 30 сут. При условии 3-х дневного сбраживания помёта, фаза отмирания микроводорослей наступила практически сразу за линейной – на 5–6 сутки (см. рис. 1В). Длительность сбраживания помёта оказала влияние на максимальную продуктивность (Pm) микроводорослей (табл. 1). Значения Pm для всех вариантов эксперимента определяли на линейной фазе роста культуры по уравнению B=B0+Pm*t (Rsq=0,99). Так, при сбраживании в течение 3 суток показатели Pm были выше на 15–19% по сравнению с вариантами, где помёт сбраживали 21 и 30 суток. Со значениями максимальной биомассы (Bm) отмечена та же тенденция (табл. 1). Однако по сравнению с контрольным образцом показатели Bm (см. рис. 1А) были ниже на 5, 22 и 27% в соответствии с длительностью приготовления вытяжки, что, по-видимому, свидетельствовало о недостаточном обеспечении культуры элементами минерального питания (рис. 2). Таблица 1. Параметры роста S. platensis Table 1. Parameters of S. platensis growth
2) ВКП 20%, интервал сбраживания – 3, 21, 30 сут. Накопительные кривые для вариантов эксперимента с концентрацией ВКП 20% (см. рис. 1C), а также контроля имели более типичную S-образную форму. Отмечено превосходство использования данной концентрации вытяжки при условии 3-х дневного сбраживания куриного помёта по сравнению с контролем: значения максимальной биомассы были выше на 11%, максимальной продуктивности – на 15% (см. рис. 2). Рис. 2. Зависимость максимального урожая (Bmax) S. platensis от концентрации ВКП в питательной среде и сроков сбраживания Fig. 2. Dependence the maximum crop S. platensis from MCE concentration in the nutrient medium and fermentations time
В контрольном варианте максимальная плотность культуры составила 1,2 г АСВ/л, несмотря на то, что стандартная питательная среда Заррук рассчитана для синтеза около 4 г биомассы S. platensis. В этом случае можно предположить, что рост культуры был ограничен интенсивностью освещения, поскольку все остальные условия были оптимальными. Более высокий прирост плотности S. platensis (1,35 г АСВ/л) по сравнению с контролем объясняется наличием в вытяжке биостимуляторов, которые присутствовали в курином помёте и перешли в водный раствор (Лысенко, Титов, 2014; Теучеж, 2017). С другой стороны, учитывая специфическую тёмную окраску вытяжки, с увеличением ее содержания в культиваторах происходит затемнение клеток S. platensis, что должно было усилить влияние лимитирующего светового фактора и соответственно ограничить рост культуры. Однако следует отметить, что в процессе роста микроводорослей наблюдалось осветление культуральной среды, что было зафиксированно в динамике фотометрическим методом. При выращивании микроводорослей на 21 и 30-дневной вытяжках стационарная фаза роста наступила на 7 сутки, а фаза отмирания была слабо выражена. Установлен факт снижения кинетических характеристик исследуемого вида микроводорослей при заданной концентрации ВКП с увеличением времени сбраживания помёта с 3 до 30 суток: Bm – на 21%, Рm – на 18,5%.
3) ВКП 30%, интервал сбраживания – 3, 21, 30 сут. Накопительные кривые имели S-образную форму. При условии 3-х дневного сбраживания куриного помёта отмечено превосходство кинетических характеристик микроводорослей по сравнению с контролем. Значения максимальной биомассы были выше на 15%, максимальной продуктивности – на 4%. При выращивании микроводорослей на 21 и 30-дневной вытяжках ВКП, с 6-х суток отмечена фаза замедления роста S. platensis. Стационарная фаза роста началась с 7-х суток, фаза отмирания была слабо выражена. С увеличением времени сбраживания помёта с 21 по 30 сутки отличий между значениями максимальной продуктивности не выявлено, однако численно данный показатель был ниже контрольного на 6%, а варианта с 3-х дневной ВПК – на 20%. Значения максимальной продуктивности также бы ниже контрольного варианта на 4 и 13% соответственно.
Заключение Апробирован способ утилизации отходов птицеводческих производств за счет приготовления водной вытяжки и использования её в качестве питательной среды для выращивания S. platensis. Экспериментально показано, что длительность сбраживания помёта оказывает влияние на кинетические характеристики цианобактерии S. platensis. Впервые проведена сравнительная оценка кинетических характеристик S. platensis в зависимости от способа приготовления органической вытяжки (сроков сбраживания куриного помета). Установлен оптимальный временной интервал сбраживания отходов домашней птицы для приготовления питательной среды и увеличения продукционных характеристик цианобактерии S. platensis. Сбраживание ВКП в течение 3 суток обеспечивает максимальные значения кинетических характеристик микроводорослей при всех исследуемых концентрациях вытяжки. Исключением является вариант 10%-ой вытяжки, где значения максимальной биомассы ниже контроля на 13%. Минимальные значения ростовых характеристик S. рlatensis получены при использовали 10%-ой вытяжки куриного помета после 21 и 30 суток сбраживания. Параллельно для исследуемого временного интервала сбраживания ВКП установлен диапазон концентраций вытяжки, обеспечивающий максимальный урожай спирулины. Показано, что при концентрации ВКП в культиваторах 20–30% максимальный урожай культуры выше, чем в контроле, на 11–15%, при этом становится возможным значительно снизить материальные затраты на приготовление классических питательных сред с использованием минеральных солей. Таким образом, использование сточных вод в качестве питательных сред для выращивания микроводорослей (низших фототрофов) позволит решить экологическую проблему загрязнения окружающей среды и снизить себестоимость микроводорослевой продукции в несколько раз.
Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье. Исследования выполнены в рамках Госзадания ФИЦ ИнБЮМ № АААА-А18-118021350003-6.
Список литературы
Статья поступила в редакцию 14.12.2019
Об авторах Горбунова Светлана Юрьевна - Gorbunova Svetlana Yu. кандидат биологических наук svetlana_8423@mail.ru Корреспондентский адрес: Россия, 299011, Севастополь, пр. Нахимова, 2, ФИЦ ИнБЮМ; тел. (8692)54-41-10.
ССЫЛКА НА СТАТЬЮ: Горбунова С.Ю. Влияние длительности сбраживания и концентрации вытяжки куриного помета на продукционные характеристики Spirulina (Arthrospira) platensis (Nordst.) Geitler. // Вопросы современной альгологии. 2019. № 3 (21). С. 67–75. URL: http://algology.ru/1571 DOI - https://doi.org/10.33624/2311-0147-2019-3(21)-67-75
Уважаемые коллеги! Если Вы хотите получить версию статьи в формате PDF, пожалуйста, напишите в редакцию, и мы ее вам с удовольствием пришлем бесплатно. При перепечатке ссылка на сайт обязательна
Effect of fermentation time and chicken manure extract concentration on Spirulina platensis (Nordst.) Geitler production characteristics Svetlana Yu. Gorbunova FIC «Kovalevsky Institute of Biology of the Southern Seas RAS» (Sevastopol, Russia) The optimal time interval of poultry waste fermentation for the nutrient medium preparation and increasing the cyanobacteria S. platensis production characteristics were established. The processing of poultry farm waste consisted in the preparation of model wastewater-water manure chicken extract (MCE) at different intervals of its fermentation (3, 21 and 30 days). For the first time, a comparative assessment of the S. platensis kinetic characteristics depending on the method of organic extract preparation (terms of chicken manure fermentations) was carried out. Fermentation of the MCE for 3 days provides the maximum kinetic characteristics of microalgae at all investigated extract concentrations. The minimum S. platensis growth characteristics were obtained using a 10% MCE after 21 and 30 days of fermentation. It was shown that at the MCE concentrations in cultivators of 20–30%, the maximum crop yield was higher than in the control by 11–15%. At the same time, it is possible to significantly reduce the material costs for the classical nutrient media preparation using mineral salts. The use of waste water from poultry farms as nutrient media for microalgae growing will solve the ecological problem of environmental pollution and reduce the cost of microalgae products several times. Key words: Spirulina (Arthrospira) platensis; growth characteristics; biomass; nutrient medium; manure chicken extraction
References
Authors Gorbunova Svetlana Yu. ORCID – https://orcid.org/0000-0003-2770-1221 FIC «Kovalevsky Institute of Biology of the Southern Seas RAS», Sevastopol, Russia svetlana_8423@mail.ru
ARTICLE LINK: Gorbunova S.Yu. Effect of fermentation time and chicken manure extract concentration on Spirulina platensis (Nordst.) Geitler production characteristics. Voprosy sovremennoi algologii (Issues of modern algology). 2019. № 3 (21). P. 67–75. URL: http://algology.ru/1571 DOI - https://doi.org/10.33624/2311-0147-2019-3(21)-67-75
Dear colleagues! If you want to receive the version of the article in PDF format, write to the editor,please and we send it to you with pleasure for free. When reprinting a link to the site is required
К разделу ОБЗОРЫ, СТАТЬИ И КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
![]() |
![]() |
|
![]() | ![]() | ||
|
|